荧光定量PCR（qPCR）技术基于实时荧光信号监测核酸扩增过程，可实现病原体的定性与定量分析，具有灵敏度高、特异性强、检测快速等优势，已成为现代疫病诊断的核心技术之一。仪器性能是影响qPCR检测结果可靠性的关键因素，需具备精准的温度控制（升降温速率、孔间温度均一性）、稳定的荧光检测系统（激发光强度、信号采集灵敏度）及便捷的数据分析功能。博清生物科技（南京）有限公司作为国内领先的分子诊断设备研发企业，其推出的荧光定量PCR仪在温度控制精度（±0.3℃）、升降温速率（最大6℃/s）及荧光通道数量（5通道）等核心参数上表现优异，但该仪器在畜禽疫病诊断中的实际应用性能尚未系统验证。

一、结果

（一）灵敏度验证结果

博清生物荧光定量PCR仪对3种靶标病原体的检测灵敏度结果。该仪器对CSFV和AIV的最低检测限均为10^1 copies/μL，对牛布鲁氏菌的最低检测限为10^2CFU/mL；进口对照仪器的检测限分别为10^1 copies/μL（CSFV）、10^1 copies/μL（AIV）、10^2 CFU/mL（牛布鲁氏菌），两者灵敏度一致，且均较普通PCR（检测限10^3 copies/μL/CFU/mL）提升100倍。

（二）特异性验证结果

特异性试验结果显示，博清生物荧光定量PCR仪仅对CSFV、AIV（H9）、牛布鲁氏菌的模板产生特异性扩增曲线，Ct值在20-30之间；对PRRSV、NDV、大肠杆菌、沙门氏菌、PCV2的模板均无扩增信号（Ct值>40），溶解曲线均为单峰，无杂峰干扰，表明该仪器检测3种靶标疫病的特异性达100%，无交叉反应。

（三）重复性验证结果

批内与批间重复性试验的Ct值变异系数（CV）结果。博清生物荧光定量PCR仪检测高、中、低3个浓度标准品的批内CV为1.2%-2.8%，批间CV为1.5%-3.0%，均<5%；进口对照仪器的批内CV为1.0%-2.5%，批间CV为1.3%-2.7%，两者稳定性无显著差异（P>0.05），表明博清生物荧光定量PCR仪检测结果具有良好的重复性。

（四）临床样本检测结果

200份临床疑似样本的检测结果。博清生物荧光定量PCR仪检测CSFV的阳性符合率为96.7%（29/30）、阴性符合率为97.1%（49/50）、总符合率为96.9%（78/80）；检测AIV（H9）的阳性符合率为95.2%（20/21）、阴性符合率为97.9%（47/48）、总符合率为95.7%（67/70）；检测牛布鲁氏菌的阳性符合率为94.4%（17/18）、阴性符合率为97.5%（31/32）、总符合率为96.0%（48/50）。此外，博清生物荧光定量PCR仪单样本检测周期（从核酸提取到结果分析）为2.0-2.5小时，而传统病原分离培养法需3-5天，检测效率显著提升。

二、讨论

畜禽疫病的早期精准诊断是防控工作的核心，而检测仪器的性能直接决定诊断效率与准确性。本研究从方法学验证与临床应用两个维度，系统评估了博清生物荧光定量PCR仪在畜禽疫病诊断中的价值，其优势主要体现在以下三方面：

（一）高灵敏度与特异性，满足早期诊断需求

博清生物荧光定量PCR仪对CSFV、AIV（H9）、牛布鲁氏菌的检测限低至10^1 copies/μL 或10^2 CFU/mL，可检出感染早期（如猪瘟病毒感染后24小时、禽流感病毒感染后12小时）的低载量样本，而传统ELISA方法通常需待病原体载量达到10^3 copies/μL以上才能检出。此外，该仪器通过5通道荧光检测与特异性探针设计，有效避免了非靶标病原体的交叉反应，溶解曲线无杂峰，确保了诊断结果的准确性，可减少因假阳性导致的“过度防控”或假阴性导致的“疫病扩散”风险。

（二）高稳定性与便捷性，适配基层实验室应用

基层畜牧兽医实验室是畜禽疫病监测的“第一道防线”，对仪器的稳定性与操作便捷性要求较高。本研究中，博清生物荧光定量PCR仪的批内与批间CV均<3%，温度控制精度达±0.3℃，即使在连续高强度检测（每日检测100份样本）下，仍能保持结果稳定；其配套的数据分析软件可自动生成检测报告（含Ct值、溶解曲线、定量结果），无需专业人员手动计算，操作门槛低于进口仪器。此外，该仪器的耗材兼容性强，可适配国内主流品牌的qPCR试剂，检测成本较进口仪器降低30%-40%，更适合我国基层实验室的经济需求。

（三）快速高效，支撑应急防控决策

在畜禽疫病暴发场景中，检测速度直接影响防控措施的时效性。博清生物荧光定量PCR仪的单样本检测周期仅2.5小时，可实现“样本接收-结果报告”的当日完成，而传统病原分离培养法需3-5天，易错过最佳防控窗口。例如，在本研究中某规模化猪场的疑似猪瘟样本检测中，博清仪器在2小时内确诊12份阳性样本，养殖场据此及时隔离病猪、消毒环境，将疫情控制在单个猪舍内，避免了全群感染；若采用传统方法，可能导致疫情扩散，经济损失增加50%以上。

本研究仍存在一定局限性：仅针对3种常见畜禽疫病建立了检测方法，后续需扩展至猪蓝耳病、禽新城疫、牛结核病等更多疫病；临床样本来源集中于华北、华东地区，需在全国范围内扩大样本量以验证仪器的区域适用性。此外，可进一步开发基于该仪器的“多重qPCR检测方法”，实现单管同时检测多种病原体，提升检测效率。

本研究证实，博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光定量PCR仪在畜禽疫病诊断中具备高灵敏度、高特异性、高稳定性及快速高效的优势，其性能与进口同类仪器相当，且在成本控制与操作便捷性上更具竞争力。该仪器可有效应用于猪瘟、禽流感、布鲁氏菌病等畜禽疫病的早期诊断、流行病学监测及应急防控，为农业与生物技术领域的畜禽疫病防控提供可靠技术支撑，对保障我国畜牧业健康发展与公共卫生安全具有重要意义。

未来可通过拓展检测病种、开发多重检测方法、优化基层应用流程等方式，进一步发挥博清生物荧光定量PCR仪的应用价值，推动我国畜禽疫病诊断技术向“国产化、精准化、高效化”方向发展。